腺病毒(Adenovirus)是一种非整合型病毒,直径在70~90nm,病毒颗粒有252个壳粒呈二十面体排列组成。基因组是线状双链DNA,两端各有100bp的反向重复序列,对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。根据DNA复制周期的不同,编码区分为早期基因区和晚期基因区。前者又细分为E1~E4四个区,主要负责编码调节蛋白;而后者分为L1~L5五个区,负责编码结构蛋白。腺病毒基因组中早期表达的调节蛋白可以调控晚期基因的表达,其中最先表达的是E1区基因,它所表达的蛋白(包括E2产物) 是腺病毒基因组复制、病毒包装和其他蛋白表达所必需的(图1)。
图1 腺病毒作用机制
现已51种人腺病毒,根据组织嗜性不同被分成ABCDEF六个不同亚群,其中C亚群的第2和第5血清型最常被用于构建腺病毒载体(表1)。
表1 人类腺病毒血清型分类
分组 | 血清型 |
A | 12,18,31 |
B | 3,7,11,14,16,21,34,35,50 |
C | 1,2,5,6 |
D |
8-10,13,15,17,19,20,22-30,32 33,36-39,42-49,51 |
E | 4 |
F | 40,41 |
腺病毒与慢病毒、腺相关病毒、逆转录病毒载体相比,具有宿主范围广,免疫原性强,基因容量大,不与基因组整合,瞬间表达等特点,目前较为成熟的载体系统有非复制型(如AdMax)和复制型(又叫溶瘤腺病毒)两种。腺病毒适于在短时间内进行基因高表达的实验。
和元生物腺病毒的生产和指控采取了国际学术界公认的标准流程,采用二质粒系统在293细胞中进行包装。所获得的病毒颗粒经过超速梯度离心和过滤,并通过壳蛋白免疫法进行滴度测定。一般情况下腺病毒的滴度在1010~1011pfu/ml,完全可以满足各类实验的使用要求。
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